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参考文献并略做修改。大豆多糖配制15mg/L的固体SSPS溶液,准确取200μLSSPS溶液于5mL具塞试管中,碱催加入200μL4m01/L的化剂三氯酸(TFA)溶液,混合均匀后冲氮气(N2)3min,脱酯封管后置于121℃烘箱中2h;冷却后加入200μL甲醇,效果氮气吹干,影响因素重复加入甲醇并氮气吹干3~5次;将所得残渣用水定容至10mL容量瓶,大豆多糖过0.22μm的固体微孔滤膜保存待测。将所得样品利用色谱仪进行检测。碱催色谱条件:色谱柱:3mm×150mm阴离子交换色谱柱:流动相:A相:超纯水,化剂B相:0.25mol/LNa0H溶液,脱酯C相:1mol/L醋酸钠:梯度洗脱(以体积分数计):B2%(0~22min),效果B2%~80%(22~23min),影响因素B80%(23~30min),大豆多糖B80%~2%(30~31min),B2%(31~40min);进样体积:20μL;流量:0.5mL/min。根据标准样品色谱图谱,计算样品中单糖组成与质量分数。
利用Excel2010版软件对数据进行分析。
反应温度是影响碱性固体催化剂催化过程最重要的因素之一。为了探讨催化温度的影响,在同定底物SSPS质量分数5.0%、催化剂Mg0投料质量比为1:5以及反应时问(4h)条件下,将反应温度设置在80~120℃之问,每5℃一个间隔进行反应,反应结束后测定产物相对分子质量、酯化度以及单糖组成,结果见表1和表2。
从表1结果可以看出,利用Mg0催化SSPS脱酯,随着反应温度升高,产物SSPS的相对分子质量(Mw和Mn)不断降低,酯化度也不断降低。同时,产物的多分散性(PDI)也随着反应温度的升高而逐渐增加,这说明利用高温催化,不仅导致产物相对分子质量降低,更会使得产物均匀性下降,这可能对产物性质和应用不利。
相关文献曾经报道,SSPS的甲酯化度越低,其在酸性条件下稳定乳蛋白的能力越好;在甲酯化度25%以下时,SSPS存酸性条件下稳定酪蛋白的能力可以与高酯果胶媲美。值得注意的是,表1结果显示,利用碱性催化剂Mg0在催化剂投料质量比1:5以及反应时问4h条件下催化SSPS脱甲酯,温度必须超过95℃,产物酯化度才能低于30%。
单糖组成可以有效判断SSPS脱酯过程主链和侧链断裂的情况。将各个温度段催化获得的产物进行单糖组成分析,结果如表2所示。SSPS主链结构主要南聚鼠李糖半乳糖醛酸长链和聚半乳糖醛酸短链组成,侧链主要为聚阿拉伯糖和聚半乳糖;其中聚半乳糖醛酸C-3位点由部分木糖修饰,而侧链聚半乳糖可能存在中性糖修饰,包括岩藻糖、葡萄糖、小糖和阿拉伯糖等(如图1所示)。因此,从半乳糖醛酸与鼠李糖比例以及岩藻糖、葡萄糖等仅存在于聚半乳糖侧链上的中性糖的含量变化,可以推测催化过程SSPS结构变化情况。从表2结果看出,半乳糖醛酸与鼠李糖比例先在80℃出现升高,然后随着温度的升高逐渐降低,而葡萄糖残基几乎下降了90%,随后缓慢下降,而甘露糖和果糖残基在80℃催化时就直接降为零。结合表1结果,脱酯过程相对分子质量迅速降低一半,然后缓慢下降的情况,可以说明在80℃时脱酯时,尽管主链断裂,但是SSPS的侧链中的中性糖残基易更被脱除,使得主链中的聚鼠李糖和半乳糖醛酸含量相对增加;随着脱酯温度不断升高,主链破坏不断加大,因此半乳糖醛酸与鼠李糖比例不断下降。而半乳糖残基和阿拉伯糖残基比例不断上升结果也进一步说明,利用Mg0催化SSPS脱酯时,主链会受到破坏,侧链上中性糖也会被脱除,但聚阿拉伯糖和聚半乳糖侧链本身降解要比主链降解缓慢。
响投料质量比是影响碱性固体催化剂催化过程的重要因素之一。为了探讨催化剂投料比对催化过程的影响,在固定底物SSPS(质量分数5.0%)、反应温度(100℃)以及反应时间(4h)条件下,分别催化剂投料质量比设置为1:2、1:5、1:10、1:25和1:100进行反应,反应结束后测定产物相对分子质量、酯化度以及单糖组成,以探究投料比因素对Mg0脱酯效果的影响。结果如表3和4所示。
从不同投料比条件下100℃反应4h的结果看,催化剂投料质量比从1:100增加到1:5,酯化度显著下降,但产物SSPS的相对分子质量和多分散性变化相对比较小;而进一步增加催化剂的投料比,产物的相对分子质量、多分散性和酯化度均变化很小。这表明催化剂的添加量达到一定比例后,不改变反应温度或者时问,不能进一步脱酯。表3结果也说明,存固定反应温度100℃反应4h的条件下,通过改变催化剂投料质量比,很难使SSPS的酯化度低于27%。
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相关链接:醋酸钠,鼠李糖,聚半乳糖醛酸,岩藻糖
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